精確制導,一擊即中—人細小病毒B19血清學檢測之抗原選擇

添加時間:2021年5月27日

精確制導,一擊即中---人細小病毒B19血清學檢測之抗原選擇

 

B19病毒的流行病學

人細小病毒B19(HumanParvovirus B19)是常見的病毒之一。1975年,在對無癥狀獻血者的血液樣本進行乙型肝炎病毒篩查時,首次發現了這種病毒。由于其是在B組的第19號樣本中發現的,故命名為B19病毒。

B19病毒是全球性常見的人類傳染病原體,可引起諸如貧血、流產、關節炎等。調查B19病毒的IgG抗體陽性率,結果發現,1-5歲的兒童為2%-15%,6-19歲的兒童為15%-60%,成人為30%-60%,老年人為85%以上。

B19病毒感染的臨床表現受感染者的年齡和免疫狀態等因素影響。在B19病毒的感染中,孕婦感染尤其引起重視。據統計,每年育齡婦女的血清轉換率約1.5%。

當前,各國均出臺B19病毒相關的診療指南或專家共識。包括美國婦產科醫師學會、加拿大母胎醫學委員會和歐洲等國家均明確:若孕婦接觸了B19病毒,應檢測特異性IgG和IgM,以判斷是否產生危害。

中國在2020發布《TORCH實驗室規范化檢測與臨床應用專家共識》,強調孕期應防范原發感染,推薦定量檢測特異性IgG和IgM來判斷感染狀態。1

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圖1:人細小病毒B19感染孕期檢測流程

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B19病毒的血清學檢測及抗原選擇

2021年4月,國家藥品監督管理局發布《人細小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊技術指導原則》,對B19病毒的抗體檢測試劑進行明確指導,推薦使用結構蛋白進行抗體檢測。如2VP2是結構蛋白中被研究最深入的蛋白之一。

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2:推薦使用結構蛋白檢測人細小病毒B19的特異性抗體

我們嘗試從蛋白質組學角度理解該建議。B19病毒是一種小型無包膜的ssDNA病毒。其編碼主要蛋白有衣殼蛋白VP1、衣殼蛋白VP2和非結構蛋白NS1,如圖3。衣殼蛋白呈二十面體對稱排列。據研究,VP2約占總衣殼蛋白95%,VP1約占5%。

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圖3:人細小病毒B19基因組和蛋白轉錄

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通過蛋白質印跡法,用特異性抗體檢測病毒衣殼蛋白的表達。發現衣殼蛋白VP2(58kDa)在感染后12h-24h內開始積累。感染后VP2蛋白積累與VP-mRNA表達量增加的時間段非常吻合。此外,沒有觀察到衣殼蛋白VP1(84kDa)的信號。如4

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圖4:衣殼蛋白VP2的蛋白表達動力學

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另有研究表明,分別使用VP2重組蛋白與B19病毒裂解物,檢測臨床血清(含特異性IgG和IgM),兩者具有高的相關性。如5

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5:捕獲法分別檢測VP2重組蛋白與Sf9細胞裂解物的患者血清抗體

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有基礎研究證明,結構蛋白VP2在哺乳動物或昆蟲細胞中表達,在不存在病毒DNA的情況下可以自組裝,形成結構與病毒粒子相似的蛋白,也就是病毒樣顆粒。該研究稱VP2病毒樣顆粒的免疫原性和免疫反應性類似天然病毒粒子。如6

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6:衣殼蛋白VP2病毒樣顆粒的電鏡掃描

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總結

人細小病毒B19作為一種重要的人類病原體,在免疫力低下的患者中可引起嚴重疾病。隨著對病毒的認識日益增強,血清學診斷的價值也被重視。診療指南、試劑注冊指導原則、醫療收費標準等驅動因素日益完善,也從側面證明血清學診斷在B19病毒防治中的價值。

抗原是抗體檢測試劑的關鍵。我們推薦衣殼蛋白VP2病毒樣顆粒用于特異性IgG和IgM檢測。VP2占總衣殼蛋白約95%,在病毒感染12h后開始在體內表達累積,是急性感染/早期感染出現的標志物之一。此外,重組VP2蛋白可自組裝成病毒樣顆粒,蛋白結構與天然病毒粒子相似,可以最大保留免疫反應性。使用VP2病毒樣顆粒,在技術上更符合試劑注冊指導原則的要求。

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參考文獻
1.Human parvovirus B19.
2.Parvovirus infection.
3.Clinical manifestations and diagnosis of parvovirus B19 infection.
4.Clinical manifestations and treatment of Epstein-Barr virus infection.
5.TORCH實驗室規范化檢測與臨床應用專家共識(2020).
6.人細小病毒B19IgM/IgG抗體檢測試劑注冊技術指導原則.
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編輯:Steven | 校對:Harris | 責編:Hillson

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